1. 午夜黄色网站,午夜福利视频免费看,午夜导航APP大全,欧美午夜精品一区二区蜜桃

      重慶3M測試片
      您當前的位置 : 首 頁 > 新聞中心 > 行業資訊

      細胞培育的步驟和注意事項

      2021-08-06

      1、細胞複蘇

      將凍存細胞從液氮中取出後,在37℃水浴鍋內不斷搖擺促進其融化。將融化的細胞移入離心管中,參加37℃預熱的DMEM完全培育基中(其中胎牛血清約為10%),悄悄吹勻,離心,500g離心2min,棄上清液。

      參加DMEM徹底培育基清洗,棄上清液。參加DMEM徹底培育基,悄悄吹打混勻,製成細胞懸液,接種於培育皿/瓶中,在含5% CO2的細胞培育箱中培育。

      2、細胞傳代

      當細胞密度達到80%~90%(過早產值缺乏,過晚細胞狀態欠安,1:2至1:10以上的比率傳代培育,一般1:3至1:5細胞一代,即從細胞接種到別離再培育的一段時刻,非細胞有絲分裂次數)時,去掉徹底培育基,用1X PBS清洗2次。

      參加胰蛋白酶(注意:消化液的量以蓋住細胞很好,很好的消化溫度是37℃。顯微鏡下調查細胞:倒置顯微鏡下調查消化細胞,若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此刻細胞消化適度)進行消化,放入細胞培育箱中約2-3min。

      參加適量DMEM徹底培育基停止胰蛋白酶消化,轉移至離心管後500g離心2min,棄上清液,再參加DMEM徹底培育基清洗,棄上清液。

      參加DMEM徹底培育基,悄悄吹打混勻,吸取10微升進行計數,然後依照所需細胞量在含5% CO2的細胞培育箱持續培育。

      3、細胞凍存

      當細胞密度達到80%~90%時,去掉徹底培育基,用1X PBS清洗2次。參加胰蛋白酶進行消化,放入細胞培育箱中約2-3min。參加DMEM徹底培育基停止胰蛋白酶消化,轉移至離心管後500g離心2min,棄上清液,再參加DMEM徹底培育基清洗,棄上清液。參加lml凍存液(90%胎牛血清,10%DMSO。 一般來講血清含量能夠在10%-90%之間調整,凍存液中參加血清一方麵可認為細胞供給養分,另一方麵能夠在細胞凍存過程中供給非滲透性維護物質,如蔗糖,白蛋白等從而很好地維護細胞),放入凍存管內(管內有異丙醇,以確保溫度下降的速度),當即放入4℃冰箱中凍存30min,然後放入-20℃冰箱中凍存30min,再置於-80℃冰箱內過夜。然後放入液氮中,能夠保存至少兩年,如不放人液氮,能夠保存三個月。 

      細胞凍存和複蘇的原則是:慢凍速融,這樣也會有利於堅持細胞的生機。凍存細胞不加任何維護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞逝世。

      細胞培養.jpg

      4、注意事項

      (1)預熱培育用液:把已經製造好的裝有培育液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱;

      (2)用75%酒精擦拭經過紫外線照射的超淨工作台和雙手;

      (3)正確擺放運用的器械:確保足夠的操作空間,不僅便於操作並且減少汙染;

      (4)點燃酒精燈:注意火焰不能太小;

      (5)嚴厲的無菌操作;

      (6)貼壁細胞消化適度:消化的時刻受消化液的品種、製造時刻、參加培育瓶中的量等諸多要素的影響,消化過程中應該注意培育細胞形狀的變化,一旦胞質回縮,連接變鬆懈,或有成片浮起的痕跡就要當即停止消化;

      (7)傳代細胞一切的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次還是要隻進行一種細胞的操作,每種細胞運用一套器件。避免交叉感染;

      (8)傳代細胞瓶口每次翻開或許封閉都需要在酒精燈上消毒。

      標簽

      上一篇:微生物實驗室的安全設計2021-07-30
      下一篇:培育基中蛋白腖的作用2021-08-06

      最近瀏覽:

      網站地圖午夜视频福利 午夜精品在线免费 午夜TV色欲 香蕉视频黄色片 香蕉视频91下载 羞羞视频大全 好色先生污视频 硬汉视频下载免费版